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技術文章 > 磷酸化蛋白檢測試劑盒相較于傳統方法的優勢
磷酸化蛋白檢測試劑盒相較于傳統方法的優勢
發布日期：
2017-12-18
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2520
磷酸化蛋白檢測試劑盒已逐漸成為測定蛋白磷酸化的一種有力方法。ELISA的定量能力優于Western blot，且在調節激酶活性和功能的研究中表現出巨大的作用。這種微孔板形式的分析一般利用目的蛋白特異的捕獲抗體，與磷酸化狀態無關。隨后讓目的蛋白結合在抗體包被的分析板中，目的蛋白可以是純的，也可以是復雜的異質樣品(如細胞裂解液)中的一個組分。加入待分析的磷酸化位點特異的檢測抗體。這些分析通常設計為顯色或熒光檢測。產生的信號強度與zui初樣品中存在的磷酸化蛋白的濃度成正比。與更為傳統的免疫印跡相比，磷酸化特異的ELISA技術具有一些優點。
首先，利用經過校準的標準品，可輕松定量結果。
其次，以三明治形式使用目的蛋白特異的兩個抗體，帶來了高的特異性。
第三，ELISA的靈敏度更高允許使用更少量樣品，檢測低豐度的蛋白。
zui后，微孔板形式的通量比傳統的Western blotting要高得多。ELISA通常帶來了激酶活性的間接測定。不過，另一類ELISA技術使用固定化的捕獲抗體、底物和磷酸化底物的檢測方法，帶來激酶活性的更直接測定。
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