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游離DNA提取試劑盒的操作手段

發布日期: 2020-04-23
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   近幾年來,隨著基因診斷技術的發展,游離DNA的應用價值越來越大,如優生篩查、腫瘤早期診斷、遺傳病檢測和病原體感染基因檢測等。游離DNA是存在于血液(血漿或血清)、腦脊液等體液中的細胞外DNA,也叫循環DNA。其主要是由單鏈或雙鏈DNA以及單鏈與雙鏈DNA的混合物組成,以DNA和蛋白質復合物或游離DNA兩種形式存在。分析血液中腫瘤特異性的胞外DNA片段可對普通血液樣品進行特異性地腫瘤類型檢測。游離DNA提取試劑盒的操作手段你知道嗎?
  1. 請自行準備:無水乙醇、1.5mL離心管。 
  2. 取出洗滌液,按以下操作: 
  a) 洗滌液A:21mL加入9mL無水乙醇;42mL加入18mL無水乙醇。 b) 洗滌液B:9mL加入21mL無水乙醇;18mL加入42mL無水乙醇。 c) 配制好的洗滌液如出現沉淀,可在37℃溶解,搖勻后使用。 
  3. 取1.5mL離心管,加入200μL樣本,4μLDNA Carrier混合均勻,加入300μL 裂解液及20μL 消化液,振蕩混勻,56℃水浴10 分鐘。 
  4. 加入1000μL無水乙醇,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響DNA的提取與后續實驗。 
  5. 將吸附柱放入收集管內,將760μL上述溶液轉入吸附柱內,靜置2 分鐘,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內廢液; 
  6. 將吸附柱放回收集管內,將剩余760μL溶液轉移至吸附柱內,重復步驟5。 
  7. 將吸附柱放回收集管內,加500μL 洗滌液A至吸附柱內,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內廢液。 
  8. 將吸附柱放回收集管內,加500μL 洗滌液B至吸附柱內,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內廢液。 
  9. 將吸附柱放回收集管內,12,000 rpm 4℃離心2 分鐘,離去殘留的洗滌液。 
  10. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 離心管內,加入30-50 μL 洗脫液,靜置3 分鐘,12,000 rpm 4℃ 離心2 分鐘,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存。
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